高效液相色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)使用包括：安裝保護(hù)柱、過濾流動相和樣品、凈化樣品、防止柱壓過高、注意溫度和pH值、正確及時清洗等。

一.加裝保護(hù)柱

保護(hù)柱的作用是過濾流動相和樣品化學(xué)“拉圾”同時，還能有效去除流動相和樣品中的不溶性物質(zhì)。現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口.進(jìn)樣閥后部及色譜柱兩側(cè)均配有1個.2μm不同孔徑的濾器只能去除不溶性顆粒，不能去除化學(xué)污染。因此，有必要安裝保護(hù)柱，特別是在分析中藥時.中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品是保護(hù)分析柱不可缺少的措施。

保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致，粒度可大于分析柱。保護(hù)柱是一種耗材。經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析（50~100次）后，當(dāng)柱壓明顯上升或峰值變質(zhì)或基線漂移時，應(yīng)更換保護(hù)柱。

二.過濾流動相和樣品

流動相一般由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成。原則上，所有流動相都應(yīng)通過色譜柱過濾，但在實際操作中應(yīng)根據(jù)具體情況有所不同：當(dāng)有機(jī)溶劑采用色譜純度、石英亞開水或其他超純水時，過濾在保證水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量而不受污染時沒有更多的實際意義。

當(dāng)流動相中含有緩沖鹽時，需要過濾。如前所述，緩沖溶液放置一段時間后根據(jù)環(huán)境溫度不同，夏季一般不超過48h,冬季一般不超過一周)，使用前應(yīng)再次過濾。

注入流路系統(tǒng)前，樣品試液應(yīng)經(jīng)0.45μm(0.22μm最好過濾孔徑濾膜。注意區(qū)分水系和油系，兩者不能混用，以免濾膜溶解造成污染。

裝有流動相的器皿和色譜系統(tǒng)中的在線濾器應(yīng)定期清洗和更換，以防止濾器因過載而無法過濾。

三.凈化樣品

樣品中含有對色譜柱有害的化學(xué)成分，如永久吸附的蛋白質(zhì).糖和其他有機(jī)分子和強(qiáng)吸附物質(zhì)，以及可能破壞柱填料的基團(tuán)離子。樣品應(yīng)盡可能分離和純化，以去除多余的雜質(zhì)。

四.防止高效液相色譜柱柱壓過高

盡管高效液相色譜柱能承受6萬的壓力psi(磅/平方英寸)，但過高和過大的壓力變化會縮短色譜柱的使用壽命，預(yù)防的方法是防止色譜柱的使用壽命。

(1)柱壓過大時，盡量選擇較小的流速，以免超過柱最大允許壓力的一半。

(2)當(dāng)流速較大時，應(yīng)采用流速梯度的方法使流速分步到位。

(3)使用手動進(jìn)樣閥時，進(jìn)樣閥的轉(zhuǎn)換應(yīng)盡可能快。否則，超過20%的壓力沖擊很快就會使柱子報廢。使用多柱時，應(yīng)避免在高壓下進(jìn)行柱轉(zhuǎn)換。

五.注意溫度和pH值

硅膠色譜柱的最高使用溫度一般不超過60℃,以低于40℃適宜，尤其是流動相pH接近使用限度時，應(yīng)降低使用溫度。

如果溫度過高，會加速鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而改變填料特性、柱床塌陷、柱效和峰形。

目前鍵合硅膠色譜柱標(biāo)注pH適用范圍可達(dá)2~10，但在實際使用中應(yīng)避免極端pH條件，特別是堿性條件，特別是堿性條件(pH≥8)下使用，如必須在極端使用pH在環(huán)境使用中，可采用以下方法防止柱損傷：

(1)在泵與進(jìn)樣閥之間安裝預(yù)柱(飽和柱)來飽和流動相；

(2)降低使用溫度；

(3)檢測完成后，立即與所用流動混溶?！叭岷腿軇蓖耆逑础?/span>

六.高效液相色譜柱正確及時的清洗

在開始實驗之前，你應(yīng)該知道柱子里目前是什么樣的溶劑。對于新的色譜柱，如果沒有特殊的表示，則是評估報告中使用的流動相。柱中當(dāng)前的溶劑必須與分析樣品中使用的流動相互溶解。如果不能混合，則應(yīng)使用第三種溶劑與兩者混合。

異丙醇是唯一能與各種溶劑混合的試劑，可作為中介流動相使用。相反，硅膠柱的適當(dāng)儲存環(huán)境是純甲醇。如果分析流動相作為緩沖液2有機(jī)溶劑，可以用甲醇含量較低(20%)的甲醇2水代替原來的純甲醇，然后分析流動相，避免柱內(nèi)鹽的沉淀；

實驗結(jié)束后，應(yīng)及時使用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑聪到y(tǒng)，最終轉(zhuǎn)化為純甲醇清洗。對于含有緩沖鹽的流動相，最好的方法是用流動相完全一致但不含緩沖鹽的溶液進(jìn)行清洗，然后逐漸轉(zhuǎn)化為純甲醇清洗。

大多數(shù)人報道，沖洗液的體積約為柱容量的15~20倍，但最終應(yīng)該是基線是否平直.壓力是否穩(wěn)定決定。

一些制造商的色譜柱表明，流動相中有機(jī)相的最低濃度為≥5%，使用時要注意。