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干貨 | HPLC峰型問題之肩峰原因分析

欄目:行業(yè)資訊 發(fā)布時間:2023-09-14
肩峰指的是在流出曲線或吸收曲線的峰上出現(xiàn)的不成峰形的小曲折,形狀類似肩膀,故稱為肩峰。

肩峰指的是在流出曲線或吸收曲線的峰上出現(xiàn)的不成峰形的小曲折,形狀類似肩膀,故稱為肩峰。

肩峰

肩峰原因及解決方法




色譜柱過載

原因:進樣量過大或是樣品濃度過高。

解決方法:減少進樣量或稀釋樣品或換用尺寸更大、載樣量更高的色譜柱。




溶劑效應

原因:樣品溶劑和初始比例流動相的溶劑洗脫能力不同或溶解能力較差以及為了樣品的溶解性或穩(wěn)定性加入了一點的緩沖液,緩沖液的酸堿性可能會導致樣品轉化,從而導致肩峰現(xiàn)象。

解決方法:調整流動相pH或配比;使用初始比例流動相溶解樣品;使用溶劑效應消除器;更換緩沖液。

注意:樣品要現(xiàn)配現(xiàn)用,避免樣品溶解液的有機相比例、pH值發(fā)生變化而導致的溶劑效應




雜質干擾

原因:樣品或者系統(tǒng)中存在同一時間出峰的雜質,干擾主峰峰形。

解決方法:

1.排查雜質干擾來源,判斷是由系統(tǒng)引入雜質還是樣品引入雜質。

2.若是系統(tǒng)引入雜質,可以通過清洗流動相過濾頭;清洗進樣針;清洗液相管路;清洗或更換色譜柱、保護柱等。

3.若是樣品引入雜質,可以通過優(yōu)化前處理方法,對于樣品進行純化;選擇分離能力更強的色譜柱。




流動相及進樣溶劑

原因:流動相或者進樣溶劑中影響樣品,干擾主峰峰形

 解決方法:

1.排查流動相及進樣溶劑,判斷是流動相的問題還是進樣溶劑的問題。

2.若是流動相的問題,可以重新配置流動相;是流動相pH在化合物pKa±2范圍外。

3.若是進樣溶劑的問題,可以使用與初始比例流動相相同的進樣溶劑;使用溶劑效應消除器。




柱效

原因:由于色譜柱長時間使用后,色譜柱出現(xiàn)坍塌或者、理論塔板數(shù)降低造成的。

解決方法:

1.驗證色譜柱塔板數(shù),可根據色譜柱的檢測報告方法,測試其當前理論塔板數(shù)。

2.更換新的色譜柱。


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